顯微鏡照明方法
常用照明方法
樣本照明方法對於顯微術非常重要。大致分為透射照明和入射照明。使用者須根據標本和目的選擇合適的方法。
透射照明
照亮樣本的背面。適用於生物觀察,如無色、透明細胞,一般應用於生物顯微鏡。
- - 明視野照明
- 一般透過照亮樣本背面使其透明並進行觀察。在明背景的映襯下,透射出比背景更暗的部分。
- - 暗視野照明
- 與明視野照明一樣,可照亮背面,但會中斷直射光,使樣本的輪廓在暗背景下顯示。適用於觀察低對比度細胞,並且需要暗視野聚光器。
入射照明
照亮樣本的正面。在觀察3D物體(如材料和其他工業樣本)以及不透明樣本時非常有用。此類型通常應用於立體顯微鏡。
透射照明的類型
當透射照明與配備聚光鏡的光學顯微鏡一起使用時,可分為三種類型的照明:科勒照明、散射照明和臨界照明。
科勒照明
將光線聚集到物鏡的背面。這是最常用的透射照明方法,具有明亮且變化較少的照明功能。對於高倍率觀察是必不可少的。
散射照明
在反射器上放置了一塊光散射板,可實現均勻照明,但在穿過光散射板後,亮度會有所減弱。
臨界照明
可將光線聚集到樣本表面。這種方法可實現明亮照明,但是更容易導致光線的不均勻分佈。
光源差異
根據顯微鏡的不同,光源的選用也存在差異。需瞭解每種光源的特性,才能選擇合適的光源。
用於光學顯微鏡
- - 自然光(環境光)
- 外部光線進入反光鏡,以照亮樣本。必須避免陽光直射。也可使用螢光燈等人造光源來代替自然光。
- - 鎢絲燈
- 鎢絲燈廉價且易於購買,也被稱為白熾燈,廣泛用於光學顯微鏡。
- - 鹵素燈
- 與鎢絲燈相比,鹵素燈更貴,壽命更長,具有接近白色和均勻亮度的特點。
用於螢光顯微鏡
- - 汞燈
- 汞燈也稱為高壓汞燈,用作螢光觀察的光源,可激發與螢光材料的特定波長。汞燈可以在紫外線和近紅外等不同波長範圍內實現大功率照明,並且可以使用濾鏡透射所需波長的光。根據波長的不同,可選用對應的濾鏡。當使用適當的螢光染料組合時,可選擇特定螢光進行檢測。另一種類型的汞燈是金屬鹵化物燈,需要高壓電源才能運行。
- - 氙氣燈
- 這種類型的燈具有高亮度,通常用作CAMERA上的閃光燈。
- - LED燈
- 由於LED發射的光段相對較窄,因此可以透過組合LED和螢光或組合多個LED來獲得白光。LED燈具有體積小、功耗低、壽命長等特點,但根據LED的組合方式,其在特定波長下功率可能較差。